By this author

Evaluation of Platelet Functional Activity in Healthy BALB/c Mice and in EMT-6 Breast Cancer Orthotopic Model

Issue number 2 from 17.02.2025

Циркулирующие в крови безъядерные клеточные фрагменты, тромбоциты, могут рассматриваться как сенсоры состояния сосудистой стенки и латентного тромбообразования в организме. Однако разброс нормальных показателей состояния тромбоцитов слишком большой для корректного считывания информации этих сенсоров. Поэтому необходимо отладить методы оценки функционального состояния тромбоцитов мыши, чтобы затем в контролируемых условиях проверить, как различные патологические процессы изменяют состояние тромбоцитов. В настоящей работе мы адаптировали разработанные нами ранее цитометрические тесты функциональной активности тромбоцитов человека для использования в образцах крови мышей линии BALB/c и провели оценку изменения состояния тромбоцитов in vivo модели спонтанно-метастазирующего рака молочной железы EMT-6. В работе использовалась непрерывная проточная цитометрия и цитометрия в конечной точке. Наблюдалось изменение формы тромбоцитов, снижение связывания антител к GPIb, экспонирование P-селектина, активация интегринов, мобилизация кальция и экспонирование фосфатидилсерина. В результате исследования получено несколько отличий функциональной активности тромбоцитов мыши от человеческих тромбоцитов. Во-первых, по всем наблюдаемым параметрам активация тромбоцитов мыши в ответ на 2.5 мкМ АДФ была значительно слабее активации 200 мкМ AYPGKF (агонист PAR4 рецептора к тромбину). Во-вторых, в ответ на АДФ наблюдались обратимая активация интегринов и изменение формы. Основным отличием тромбоцитов мышей с опухолью стало значимое снижение их количества при выделении из крови, при этом наблюдалось снижение значений ряда параметров: связывания антител к GPIb, изменения формы, активации интегринов и подавление прокоагулянтного ответа. Полученные результаты свидетельствуют о том, что опухоль в терминальной стадии, вероятно, снижает количество циркулирующих тромбоцитов и вызывает их повреждение.

92 0

<i>Ex vivo</i> Murine Thromboinflammation Model with Validation on EMT-6 Breast Cancer

Issue number 2 from 17.02.2025

Тромбовоспаление – это комплексное взаимодействие между системой гемостаза и иммунной системой, связанное с участием нейтрофилов в процессе тромбообразования. Дисбаланс взаимной активации тромбоцитов и нейтрофилов при различных патологиях приводит к тромбозам или кровотечениям. Ранее нами была разработана методика ex vivo наблюдения процесса тромбообразования и хемотаксиса нейтрофилов в плоскопараллельных проточных камерах, покрытых фибриллярным коллагеном. Целью данной работы была разработка методики ex vivo наблюдения процесса тромбовоспаления у мышей, позволяющая анализировать взаимодействие полиморфоядерных лейкоцитов (ПМЯЛ) с растущими тромбами. Для валидации методики использовалась модель рака молочной железы у мышей линии BALB/с (7 дней после ортотопической инокуляции культурой опухолевых клеток EMT-6). В образцах крови здоровых мышей на фибриллярным коллагене образовывались полноценные тромбы, однако ядерные клетки не наблюдались. Использование комбинации фибронектина и коллагена в качестве подложки позволило индуцировать тромбообразование и отслеживать движение и поведение ПМЯЛ в окрестности тромбов. При помощи разработанной модели показано, что при онкологии рост тромбов замедлен – относительный размер тромбов при раке молочной железы составляет 21 ± 11% от поля зрения по сравнению с 39 ± 10 % у здоровых мышей. При этом количество ПМЯЛ, адгезирующих к тромбам, и скорость их движения на подложке не отличаются у здоровых мышей и мышей с опухолями. Однако количество ПМЯЛ, покидающих тромб и сползающих на фибронектин-коллагеновый матрикс, значимо увеличено у мышей с опухолью (39 ± 23 против 15 ± 8 у здоровых контролей). Таким образом, с помощью разработанной модели тромбовоспаления показано, что уже на ранних этапах развития опухоли наблюдаются нарушения процесса тромбовоспаления.

93 0