Статьи автора

Влияние хлорохина на экспрессию генов апоптоза и аутофагии в клетках MOLT-3 и IMR-32

Номер выпуска 2 от 17.02.2025

Целью исследования было сравнить влияние хлорохина (CQ) на экспрессию генов апоптоза и аутофагии в клетках двух опухолевых линий – лейкемии MOLT-3 и нейробластомы IMR-32, культивируемых в полных ростовых и бессывороточных средах RPMI-1640 и DMEM соответственно в течение 24 и 48 ч. Жизнеспособность клеток оценивали методом МТТ, экспрессию генов – методом ПЦР в реальном времени. Для теста МТТ клетки инкубировали с 10–100 мкМ CQ. Для изучения экспрессии генов апоптоза (CASP3, BAX, BCL2) и аутофагии (ULK1, BECN1, MAP1LC3B) использовали 30 и 50 мкМ CQ, которые оказывали значительный ингибирующий эффект на жизнеспособность клеток обеих линий, но не приводили к их полной гибели. Чувствительность клеток обеих линий к CQ была выше в бессывороточной среде, однако экспрессия генов апоптоза и аутофагии в них сильно различалась. В клетках MOLT-3 уровень мРНК проапоптотических генов CASP3 и BAX увеличивался после 24 ч инкубации в бессывороточной среде, в то время как в клетках IMR-32 повышение экспрессии этих генов наблюдалось только после 48 ч в присутствии более высокой концентрации CQ. В клетках обеих линий после 24-часовой обработки CQ увеличивалась экспрессия антиапоптотического гена BCL2. В клетках MOLT-3 в условиях недостатка питательных веществ наблюдались различные комбинации стимуляции генов всех трех этапов аутофагии ULK1, BECN1 и MAP1LC3B, но ни одна из схем обработки не оказала влияния на экспрессию генов ULK1 и MAP1LC3B в клетках IMR-32. Таким образом, 24-часовая обработка CQ в условиях сывороточного голодания является более оптимальной для модулирования аутофагии в клетках MOLT-3. В клетках IMR-32 CQ не оказывает значительного влияния на экспрессию генов аутофагии, а снижение их жизнеспособности связано с активацией других механизмов.

66 0

Экспрессия генов апоптоза и аутофагии в клетках HeLa и HEK 293 в условиях недостатка питательных веществ

Номер выпуска 12 от 01.12.2023

Целью исследования было сравнение степени развития аутофагии в клетках карциномы шейки матки человека HeLa-V и HeLa-R и в неопухолевых клетках эмбриональных почек человека HEK 293 в условиях голодания двух типов – 24- и 48-часового культивирования в среде DMЕM без сыворотки и 4-часовой инкубации в минимальной среде Эрла. В работе оценивали жизнеспособность клеток методом МТТ и экспрессию генов апоптоза (BCL2, BAX, CASP3) и аутофагии (ULK1, BECN1, ATG5, ATG14, MAP1LC3B) методом ПЦР в реальном времени. Культивирование в условиях сывороточного голодания и в среде Эрла привело к значительному снижению жизнеспособности клеток HEK 293, но не оказало влияния на клетки HeLa-V и HeLa-R. В опухолевых клетках обеих линий увеличивалась экспрессия гена антиапоптотического белка BCL2, в то время как в клетках HEK 293 снижалось соотношение генов BCL2/BAX и активировался ген CASP3. В клетках HeLa-V и HeLa-R в условиях недостатка питательных веществ наблюдались различные комбинации стимуляции генов начальных этапов аутофагии ULK1, BECN1, ATG5 и ATG14, но ни один из вариантов обработки не влиял на экспрессию гена MAP1LC3B. В клетках HEK 293 сывороточное голодание привело к увеличению уровня экспрессии генов BECN1, ATG5, ATG14 и MAP1LC3B. Таким образом, стимуляция аутофагии в клетках HeLa, особенно HeLa-R, препятствует развитию процессов апоптоза, в то время как в клетках HEK 293 процессы апоптоза и аутофагии происходят параллельно. Культивирование в среде DMEM без сыворотки в течение 48 ч является наиболее эффективным способом индукции аутофагии в клетках опухолевых линий и соответственно наиболее подходящей моделью для изучения роли аутофагии в развитии их резистентности к апоптотическому пути гибели.

45 0

Экспрессия эффекторов апоптоза, аутофагии и некроптоза в клетках гиппокампа крыс после избыточного потребления F^-

Номер выпуска 9 от 15.09.2024

В работе исследовали экспрессию маркеров апоптоза, аутофагии и некроптоза в клетках гиппокампа крыс после длительного потребления избыточных доз F^- на уровне транскрипции и трансляции. Самцы крыс Wistar были разделены на 4 группы, получавшие 0.4 (контроль), 5, 20 и 50 мг/л F^- (в виде NaF) в течение 12 месяцев. Изменения содержания эффекторов митохондриального (Bcl-2, Bax, каспазы-9, каспазы-3) и рецепторного (каспазы-8, Fas) путей апоптоза, посредников (Ulk-1, Beclin-1) и модуляторов (AMPK, Akt, mTOR) аутофагии, а также некроптоза (RIP и MLKL) в клетках оценивали методом иммуноблоттинга, экспрессию генов (Bcl2, Bax, Casp3, Ulk1, Beclin1, Prkaa1, Akt и mTor) – методом ПЦР в реальном времени. В гиппокампе животных, подвергавшихся действию F^-, снижалось соотношение экспрессии генов Bcl2/Bax и белков Bcl-2/Bax, активировались каспаза-9 и каспаза-3, однако уровень каспазы-8 и мембранного рецептора Fas оставался стабильным. Длительное потребление F^- не оказало влияния на содержание инициаторного белка аутофагии Ulk-1 и протеинкиназ AMPK, Akt и mTOR, но привело к ингибированию ключевого посредника аутофагии Beclin-1. Уровни экспрессии эффекторов некроптоза RIP и MLKL также не изменялись в клетках гиппокампа крыс, получавших избыток F^-. Таким образом, длительное воздействие F^- сопровождалось активацией апоптоза, преимущественно по митохондриальному пути, на фоне подавления аутофагии.

42 0